Resumo

Polihidroxialcanoatos (PHAs) são poliésteres que independente de sua composição monomérica, são sintetizados através da enzima PHA-sintase expressa por diversos microrganismos, sendo então armazenados como reserva energética em grânulos citoplasmáticos. A alteração da turbidez de cultura favorável a síntese do polímero é uma forma simples de pré-selecionar as possíveis bactérias produtoras de PHAs, mas a detecção dos isolados que possuam o gene codante da PHA-sintase é a maneira mais objetiva e conclusiva de monitorar tal potencial. Assim, o objetivo do presente trabalho foi comparar os resultados de dois protocolos para a seleção inicial de bactérias com probabilidade de produzirem PHAs entre doze microrganismos pertencentes a bacterioteca do Laboratório de Bioquímica do Parasitismo e Microbiologia Ambiental (LBPMA) da UFAL. A metodologia molecular utilizada baseou-se na reação em cadeia da polimerase (PCR) para amplificação dos genes 16S rDNA (constitutivo) e phaC-sintase (exclusivo das bactérias produtoras de PHA). Já o procedimento fenotípico, consistiu na inspeção visual (turbidez) das culturas em meio mínimo com excesso de fonte de carbono (glicose, sacarose, glicerol, óleo de soja e soro de leite), após 72h de incubação (30±1°C). Todos os isolados tiveram o gene 16S amplificado, o que comprovou a eficácia da extração de DNA. BMA08 foi a única bactéria que, apesar de ter o gene phaC-sintase detectado pela PCR, não turvou quaisquer dos meios testados. Outros cinco isolados phaC-sintase⁺, por outro lado, conseguiram turvar os meios mínimos em todas as fontes de carbono. Seis isolados foram phaC-sintase^-, sendo que quatro deles turvaram o meio mínimo em todas as fontes de carbono testadas, e dois naqueles meios contendo soro (isolado BLD05) ou soro + óleo (isolado BMA03). A turbidez de uma cultura geralmente está relacionada com a concentração de células do microrganismo, mas no caso de bactérias em diferentes meios de cultivo para síntese de PHAs, a turbidez está relacionada com a quantidade do polímero armazenado na célula. Os resultados obtidos permitem concluir que a seleção com base na detecção do gene phaC-sintase pode ser aplicada como uma ferramenta inicial para separar bactérias potencialmente produtoras de PHA daquelas que não o são, enquanto a resposta fenotípica negativa pode significar que as condições de crescimento (macro e micronutrientes, temperatura, aeração, pH, luminosidade, tempo de cultivo, etc) não favoreceram tal expressão gênica. Três dos cinco microrganismos que foram positivos nas duas abordagens foram selecionados para posterior produção e extração do polímero e detecção dos seus monômeros.